JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:34 min. • January 30th, 2026
Zacznij od oczbudzonej myszy, unieruchomionej, by ograniczyć jej ruchy.
Przechyl głowę w dół, aby odsłonić dolną część brzucha.
Zlokalizuj linię środkową brzucha i zidentyfikuj miejsce wkłucia lekko przesunięte od środka, aby uniknąć narządów wewnętrznych.
Następnie weź strzykawkę zawierającą roztwór lipopolisacharydów, będących składnikiem otoczki komórek bakteryjnej Gram-ujemnej.
Wkłuj igłę w miejsce, aby uzyskać dostęp do jamy otrzewnej, i wstrzyknij roztwór.
Po wstrzyknięciu LPS wchodzi do krążenia układowego i wywołuje odpowiedź immunologiczną.
We krwi LPS wiąże się z białkiem wiążącym LPS, które przenosi je do CD14, błonowego białka komórek odpornościowych.
CD14 dostarcza LPS do MD-2, glikoproteiny wiążącej się z receptorem Toll-podobnym 4 (TLR4), umożliwiając dimerizację TLR4.
Zdymeryzowany TLR4 rekrutuje białka adaptatorowe, które aktywują dalsze szlaki sygnalizacyjne, indukując prozapalną ekspresję cytokin i stany stanowe ogólnoustrojowe.
Modeluje to translokację mikroorganizmów oraz ogólnoustrojową aktywację immunologiczną w jelitach i innych narządach wywołaną przez produkty bakteryjne.
Delikatnie, ale stanowczo trzymaj mysz i unieruchamiaj zwierzę jedną ręką. Upewnij się, że mysz jest bezpiecznie trzymana i może normalnie oddychać.
Przechyl lekko nos myszy w stronę podłogi, aby odsłonić brzuch do wstrzyknięcia. Zlokalizuj linię środkową brzucha i wstrzyknij wymaganą objętość LPS po lewej lub dolnej lewej stronie.
Bardzo ważne jest, aby igła wchodziła do jamy otrzewnej, aby uniknąć błędnych zastrzyków.
Igła nie powinna również wchodzić zbyt głęboko w jamę otrzewnej, aby uniknąć urazu narządów wewnętrznych.
Delikatnie odłóż zwierzę do klatki domowej.
Monitoruj myszy pod kątem występowania i nasilenia endotoksemii w momencie wstrzyknięcia, a następnie co 2 godziny przez 8 godzin. Zapisz obserwacje w załączonej arkuszu wyników.