JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:19 min. • February 2nd, 2026
Zacznij od hodowli szczepu Aeromonas , patogenu bakteryjnego, uprawianego w bogatym w składniki odżywcze.
Zmierz gęstość optyczną hodowli i dostosuj stężenie bakterii, aby zapewnić stałe obciążenie infekcją.
Nakładaj hodowlę na podłoże wzrostu nicieni lub agar NGM i inkubuj, aby utworzyć jednolitą warstwę bakteryjną.
Przygotować rozwojowo zsynchronizowane larwy C. elegans – nicienie bakteriożerne utrzymywane na wzbogaconym nośniku.
Przenieś larwy na warstwę bakteryjną i inkubować, aby umożliwić doustne spożycie Aeromonas i umożliwić kolonizację jelit.
Wewnątrz żywiciela bakterie mnożą się i uwalniają cytoksyny, które uszkadzają komórki nabłonka jelitowego i prowadzą do śmiertelności.
Przenieś ocalałe nicienie na świeże płytki bakteryjne i codziennie licz żywe, martwe i niereagujące robaki, aż ostatni zginie.
Na koniec wygeneruj krzywą przeżywalności, aby ocenić żywotność gospodarza w czasie.
Najpierw wybierz jedną kolonię każdego z czterech szczepów Aeromonas i hoduj je zgodnie z protokołem tekstowym. Następnie zmierz absorpcję OD600 bulionu bakteryjnego i dostosuj ją, aż absorpcja będzie równa 2,0.
Następnie rozłóż 30 mikrolitrów bulionu bakteryjnego z każdego szczepu na płytki NGM.
Losowo wybierz i przenieś wcześniej przygotowane robaki L4 na płytki NGM z odmianami Aeromonas. Następnie inkubuj płytki w temperaturze 20 stopni Celsjusza aż do zakończenia badania.
Codziennie przenosi się wszystkie żywe robaki na nową płytkę NGM z bakteriami. Licz codziennie liczbę żywych, martwych i czujnikowych robaków, aż ostatni robak zginie.