JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 1:35 min. • January 30th, 2026
Zacznij od rurek zawierających niereplikujący się stały stadium NRP Mycobacterium tuberculosis, które ma pogrubioną warstwę zewnętrzną.
Dodaj szklane kulki do jednej rurki i potrząsaj ją, aby mechanicznie rozbić zewnętrzną warstwę mykobakterii, zwiększając przepuszczalność.
Następnie przelej zawiesina mykobakterialna ubita w koralikach do świeżej rurki.
Dodaj fluorescencyjnie znakowaną ryfampicynę, antyantykotyk przeciwgruźlicy, zarówno do zawiesin komórkowych nieleczonych, jak i "przeciętych przez koraliki".
Inkubuj poprzez potrząsanie, aby ryfampicina znakowana fluorescencją przedostała się do mykobakterii.
Z czasem do mykobakterii dostaje się więcej ryfampiciny.
Rozwidź próbki, aby oddzielić komórki i usunąć supernatant zawierający niewiązaną ryfampicinę.
Ponownie zawiesij mykobakterie w świeżym medium.
Przeanalizuj próbki za pomocą cytometrii przepływowej. Przechodząc przez wiązkę laserową, emitują fluorescencję proporcjonalną do wewnątrzkomórkowej fluorescencji-ryfampicyny.
W różnych momentach nieprzetworzone komórki NRP wykazują niższą fluorescencję niż komórki pobite przez koraliki.
Wskazuje to, że pogrubiona warstwa zewnętrzna ogranicza przedostawanie się ryfampicyny, wspierając trwałość bakterii podczas interakcji gospodarz–patogen.