JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 1:36 min • January 30th, 2026
Weźmy wyznawczą kulturę myszich makrofagów.
Dobrze traktuj test buforem zawierającym Wnt5A, cząsteczkę sygnalizacyjną, a kontrolę tylko z buforem.
Zainfekuj patogenem bakteryjnym i inkubuj.
W komórkach testowych Wnt5A aktywuje kaskadę sygnalizacyjną, która wzmacnia reorganizację cytoszkieletu, zwiększając absorpcję bakterii do fagosomów, podczas gdy komórki kontrolne pozbawione tego sygnału internalizują mniej bakterii.
Przemyj, aby usunąć bakterie nieinternalizowane, a następnie inkubuj w podłożu zawierającym antybiotyki, aby wyeliminować pozostałe bakterie zewnątrzkomórkowe.
Sygnalizacja Wnt5A przygotowuje fagosomy zawierające bakterie do fuzji z lizosomami, co umożliwia degradację bakterii.
Niektóre bakterie uciekają przez pęknięcie fagolizomów.
W komórkach kontrolnych ograniczone dojrzewanie fagosomów prowadzi do zwiększonej ucieczki.
Zbieraj komórki w określonych punktach czasowych. Dodaj wodę destylowaną, aby wywołać wstrząs osmotyczny, lizując komórki i uwalniając bakterie wewnątrzkomórkowe.
Rozprowadz lizaty na płytkach agarowych i inkubuj.
Policz kolonie, aby ocenić większy zależny od czasu spadek liczby bakterii w komórkach objętych Wnt5A.