JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:11 min • February 26th, 2026
Weź dwie miseczki zawierające matryce alginianowe drukowane w 3D, z których każda zawiera szczepy bakterii kontrolne lub testowe.
Oba szczepy konstytutywnie wyrażają fluorescencyjne białko do wizualizacji. Szczep testowy zawiera również gen indukowalny do produkcji białkowych włókien zewnętrznych zwanych włóknami curli.
Wzory drukowane są na solidnym nośniku uzupełnionym wapniem i ramnozą.
Inkubuj, aby jony wapnia mogły połączyć alginat, tworząc hydrogel.
W szczepie testowym ramnoza indukuje produkcję podjednostek curliego, które samoorganizują się na powierzchni komórki w formę włókien.
Użyj skanera fluorescencyjnego, aby obrazować wzory.
Traktuj roztworem chelatującym wapń i inkubuj poprzez potrząsanie, aby zachwycić jony wapnia, co zakłóca połączenia alginanowe i rozpuszcza hydrożel.
Usuń roztwór i ponownie namaluj wzory.
Zabieg spowodował rozpuszczenie wzoru kontrolnego, podczas gdy wzór testowy pozostał nienaruszony dzięki stabilizującej sieci włókien curli.
Inkubuj wydrukowane próbki w temperaturze pokojowej przez trzy do sześciu dni, aby umożliwić produkcję składników biofilmu, takich jak włókna Curli.
Następnie umieść płytkę na skanerze fluorescencyjnym i zrób zdjęcia płyt.
Aby rozpuścić matrycę alginatu, należy dodać 20 mililitrów roztworu cytrynianu sodu o masie 0,5 mola przy pH 7 do wydrukowanego podłoża, inkubować płytkę w temperaturze pokojowej przez dwie godziny, potrząsając z częstotliwością 30 obr./min.
Następnie odrzuć płyn i ponownie zobrazować płytki, aby porównać je z obrazami płyt przed i po zabiegu cytrynianem.