Obrazowanie poklatkowe segregacji chromosomów u bakterii znakowanych fluorescencją

Zacznij od bogatej w składniki odżywcze agarozowej poduszki na metalowej ramie, zawierającej bakterie wykazujące fluorescencyjne pochodzenie chromosomów oraz fluorescencyjne mikrosfery.

Podkład agarozowy wspiera przyczepianie i mobilność bakterii, a fluorescencyjne mikrosfery służą jako odniesienie do śledzenia segregacji chromosomów.

Dodaj olej immersyjny do soczewki obiektywu w podgrzewanej komorze inkubacyjnej mikroskopu szerokokątnego z odwróconym kątem.

Umieść próbkę nad soczewką, a następnie skup się na obszarze zawierającym wiele bakterii i co najmniej jedną fluorescencyjną mikrosferę.

Rozpocznij obrazowanie poklatkowe i rejestruj zarówno obrazy fazowo-kontrastowe, jak i fluorescencyjne.

Źródło replikacji oznaczone fluorescencją objawia się jasnym skupiskiem blisko jednego końca komórki.

Podczas podziału pierwotne kopie się duplikują; jedna gromada pozostaje na oryginalnym końcu, podczas gdy druga przechodzi do nowo powstałego końca komórki.

Takie rozwiązanie umożliwia śledzenie segregacji chromosomów w wielu podziałach i może być dostosowane do wizualizacji podobnych procesów dynamicznych u innych bakterii, w tym patogennych gatunków podczas interakcji gospodarza.

Aby wykonać mikro