Obrazowanie czasowe z żywymi komórkami drapieżnictwa bakterioworu Bdellovibrio na E. coli

Zacznij od szalki Petriego zawierającej współkulturę Bdellovibrio bacteriovorus, drapieżnej bakterii, oraz E. coli, jej ofiary, pod agarozową poduszką.

Agarozowa poduszka unieruchamia E. coli , podczas gdy B. bacteriovorus pozostaje ruchoma i aktywnie atakuje komórki ofiary.

Drapieżnik wyraża czerwony marker cytoplazmatyczny oraz zielony znacznik fluorescencyjny połączony z podjednostką polimerazy DNA w celu wizualizacji.

Zabezpiecz naczynie w uchwycie i nałóż olej immersyjny na podstawę miszki oraz obiektyw mikroskopu dla optymalnej rozdzielczości.

Zamontuj uchwyt na mikroskopie i skonfiguruj go do detekcji fluorescencji dwukanałowej.

Użyj optyki jasnego pola do zlokalizowania płaszczyzny ogniskowej i wybierz wiele nienakładających się pól obrazowania.

Ustawiaj parametry time-lapse, aby rejestrować zarówno obrazy w świetle, jak i fluorescencyjne sekwencyjnie w określonych odstępach czasu.

Metoda ta umożliwia obserwację drapieżnictwa zaczynającego od przyczepienia i inwazji ofiary, następnie transformacji komórek ofiary, wzrostu włóknistego, septacji, formowania potomstwa, a kończąc na lizie komórek ofiary.

W mikroskopii poklatkowej Florescence kokultury umieść naczynie w pojemniku na szal