JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 4:02 min. • February 26th, 2026
Weź podłoże zawierające antybiotyk blokujący podziały komórkowe.
Zaszczep ją pręcikowatym, Gram-ujemnymi bakteriami.
Inkubuj z drżeniem.
W obecności antybiotyku bakterie nadal rosną bez podziału i tworzą długie włókna.
Zbierz hodowlę i odwiruj ją w niskiej temperaturze. Usuń supernatant i przemyj filamenty roztworem sacharozy, aby zapobiec lizie.
Wyrzuć roztwór sacharozy.
Dodaj bufor, a następnie enzymy i EDTA. EDTA osłabia błonę zewnętrzną, umożliwiając lizoenzymowi wejście i rozłożenie warstwy peptydoglikanu.
Usuwa to ścianę komórkową, pozwalając komórce bakteryjnej się kurczyć. DNaza I rozbija uwolnione chromosomowe DNA z komórek i zapobiega zlepianiu się komórek.
Dodaj roztwór hipotoniczny z delikatnym wirowaniem, pozwalając komórce pobierać wodę.
Elastyczne błony pozwalają komórce przybrać kulisty kształt zwany sferoplastem.
Przełóż aliquot zawierający sferoplasty do dwóch rurek z schłodzonym roztworem izotonicznym, aby ustabilizować sferoplasty.
Aby przygotować sferoplasty E.coli Gram-ujemne , rozcieńcz nocną hodowlę w proporcji 1 do 100 w 25 mililitrach TSB w kolbce 250 mililitrów, a bakterie z powrotem do inkubatora wstrząsającego na kolejne 2,5 godziny. Gdy roztwór osiągnie gęstość o
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych