JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:34 min. • February 26th, 2026
Weźmy samicę myszy kolonizowaną pochwą z grupą B Streptococcus (GBS), oportunistycznym bakteryjnym patogenem przewodu pochwy.
Unieruchom mysz i włóż do błony pochwy wymaz zwilżony buforem.
Delikatnie obróć wymaz, jednocześnie wywierając lekki nacisk na ścianę pochwy, aby usunąć bakterie wiążące się z powierzchni.
Zanurz wymaz w buforze i mieszaj, aby zawiesić bakterie.
Seryjnie rozcieńczaj zawiesinę w buforze i nakładaj ją na chromogeniczny agar różnicowy zawierający podłoże powiązane z chromogenem.
Inkubuj, aby umożliwić rozwój bakterii.
Podczas inkubacji GBS wyraża specyficzny enzym, który hydrolizuje chromogeniczne podłoże.
Uwolniony chromogen przechodzi spontaniczną utlenianie i dimeryzację, tworząc różowy lub fioletowy związek.
Skutkuje to powstaniem różowych lub fioletowych kolonii GBS, wizualnie odróżniających się od innych kolonii bakteryjnych.
Policz kolonie, aby ilościowo określić obciążenie GBS i ocenić jego trwałość w modelu myszy.
Tuż przed wymazem zwilż bawełnę w PBS i unieruchom jedną z myszy, jak właśnie pokazałem.
Włóż wymaz na odległość 10 milimetrów do światła pochwy i delikatnie obróć cztery razy zgodnie z ruchem wskazówek zegara oraz cztery razy przeciwnie, przy jednoczesnym lekkim nacisku na ścianę pochwy.
Włóż wymazek do rurki mikrowirówki o pojemności 1,5 mililitra zawierającej 100 mikrolitrów PBS, a następnie przeszukaj rurkę i wymaz przez około 15 sekund, aby uwolnić bakterie z włókien bawełny. Następnie każdą próbkę rozcieńczaj szerejnie w PBS i podawaj 20 mikrolitrów od 1 do 10 do 10 do 10 000 rozcieńczeń na płycie agarowej z różnym medium, przygotowanej zgodnie z instrukcjami producenta, do inkubacji w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 24 godziny. Kolonie GBS będą miały kolor jaskraworóżowy lub fioletowy.