Ilościowe tłumienie biofilmu indukowanego enzymami u bakterii patogennych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:38 min. • February 26th, 2026
Weź mikropłytkę zawierającą dołki kontrolne i lecznicze, z których każda jest zaszczepiona biofilmową, patogenną bakterią.
Studnie lecznicze zawierają enzym, który zakłóca tworzenie biofilmu.
Inkubować w warunkach mikrobeztlenowych, aby stworzyć środowisko o niskiej zadołce tlenu. Sprzyja to wydzielaniu bakteryjnych cząsteczek sygnałowych, które pośredniczą w przyczepności powierzchniowej. W dołkach leczniczych enzym rozkłada te cząsteczki, zmniejszając tym samym przyczepność bakterii.
Płucz studnie, aby usunąć nieprzylegające komórki.
Wprowadź świeże podłoże i inkubuj. Przyklejone bakterie mnożą się i wydzielają pozakomórkowe substancje polimerowe, które tworzą matrycę biofilmową.
Usuń podłoże i umyj studnie.
Dodaj barwnik kationowy i inkubuj, aby umożliwić wiązanie ujemnie naładowanych składników biofilmu.
Umyj, żeby usunąć niewiązany barwnik.
Inkubuj rozpuszczalnikiem poddawanym mieszaniu, aby uwolnić związany barwnik do roztworu.
Zmierz gęstość optyczną (OD), aby ilościowo określić biomasę biofilmu.
Niższy OD w dołkach leczonych odzwierciedla zmniejszone tworzenie biofilmu, wynikające z upośledzonej początkowej przyczepności komórek.
Na początek hoduj 5-mililitrową hodowlę A. baumannii S1
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych