Mikroskopowa ocena hamowania powstawania biofilmu przez enzymy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:47 min. • February 26th, 2026
Zacznij od dwóch mikromisek na szklanym dnie zawierających zawiesiny bakterii tworzącej biofilm.
Naczynie lecznicze zawiera aktywny enzym zakłócający sygnalizację, natomiast kontrola obejmuje enzym inaktywowany.
Przykryj naczynia i inkubuj, aby umożliwić przyleganie bakterii do powierzchni mikromiski.
Przemyj ją, aby usunąć nieprzylegające komórki, następnie wprowadź świeże medium zawierające enzymy i inkubuj.
W misce kontrolnej bakterie komunikują się za pomocą cząsteczek sygnalizujących i produkują pozakomórkowe substancje polimerowe (EPS), tworząc biofilm.
Aktywny enzym rozkłada cząsteczki sygnalizacyjne, zakłócając ich funkcjonowanie i ograniczając tworzenie biofilmu.
Uzupełnij świeżym medium i inkubuj dalej, aby wzmocnić działanie enzymu zakłócające biofilm.
Usuń podłoże, dodaj lektyny oznaczone fluorescencją i inkubuj, aby umożliwić wiązanie lektyn z EPS.
Myj, aby usunąć niewiązane lektyny.
Inkubuj za pomocą utrwalacza, aby zachować architekturę biofilmu, a następnie przepłucz naczynie.
Wykonaj obrazy mikroskopii konfokalnej w celu oceny enzymatycznego hamowania powstawania biofilmu.
Aby przeprowadzić konfokalną laserową mikroskopię skaningową, czyli CLSM, biofilmów A. baumannii S1, hod
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych