JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:36 min. • February 26th, 2026
Weź probówkę z papierem filtrującym zawierającym Listeria monocytogenes. Bakterie te są pozyskiwane z zakażonych makrofagów myszych.
Dodaj bufor zawierający inhibitory RNazy, aby zapobiec degradacji RNA, a następnie przewij rurkę pod różnymi kątami, aby usunąć bakterie.
Wiruj i przelej zawiesinę do rurki zawierającej mieszankę fenolu, chloroformu i detergentu.
Wiruj i inkubuj w podwyższonej temperaturze, aby rozbić błony bakteryjne, unieszkodliwić białka i zlikwidować bakterie, uwalniając składniki wewnątrzkomórkowe.
Wirówka do oddzielenia bogatej w RNA fazy wodnej od pozostałych składników.
Pobierz RNA i przelej je do probówki zawierającej octan sodu i etanol.
Wiruj, a następnie inkubuj w niskiej temperaturze.
Octan sodu neutralizuje ujemny ładunek RNA, podczas gdy warunki etanolowe i zimne sprzyjają wytrąceniu RNA.
Wirówka, aby rozpuścić RNA.
Usuń supernatant i myj granulat zimnym etanolem.
Ponownie wiruję w wirówce, usuwam supernatant, suszę na powietrzu i dodaję wodę wolną od RNazy.
Przechowuj RNA do dalszej analizy.
Rozmroz rurki z filtrami na lodzie, aby utrzymać je w chłodzie. Następnie do każdej probówki dodaj 650 mikrolitrów zimnego octanowego EDTA lub buforu AE.
Działając tak szybko,
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych