JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:18 min. • March 31st, 2026
Zacznij od płytki hodowli zawierającej izolowane kolonie tej bakterii glebowej.
Zbierz i zaszczep kolonię w kolbie z przegrodą zawierającą podłoże odżywcze.
Inkubuj kulturę poprzez potrząsanie.
Kolba z przegrodą ma wewnętrzne grzbiety, które zwiększają turbulencję podczas potrząsania, poprawiając napowietrzanie.
Proces ten zapewnia równomierny rozkład tlenu i zapobiega zlepianiu się komórek oraz sedymentacji, umożliwiając równomierne rozprzestrzenianie składników odżywczych.
Bakterie szybko się mnożą, tworząc gęstą zawiesinę, której komórki wykazują jednolite cechy fizjologiczne.
W regularnych odstępach czasu zbieraj próbkę w kuwetcie.
Za pomocą spektrofotometru przepuszczaj światło przez próbkę. Ilość przechodzącego światła jest mierzona, aby ilościowo określić wzrost bakterii, znany jako gęstość optyczna (OD).
Wybieraj hodowle bakteryjne w fazie wykładniczej do wczesnej stacjonarnej, ponieważ komórki na tym etapie są wysoce metabolicznie aktywne i dlatego najbardziej podatne na efektywne zakażenie bakteriofagami.
Komórki Arthrobacter są hodowane z kolonii narysowanych na płycie agarowej LB, inkubowane w temperaturze 30 stopni Celsjusza przez dwa do trzech dni.
Użyj sterylnej pętli, aby wybrać kolonię i dodać ją do 50 mililitrów bulionu LB w kolbie z przegrodą hodowlą. Inkubuj kolbę w inkubatorze potrząsającym przy 225 obr./min w temperaturze 30 stopni Celsjusza przez około 24 godziny, aby uzyskać komórki wykładnicze lub wczesne fazy stacjonarnej do eksperymentów z infekcją fagami.
Uważnie monitoruj stan wzrostu bakterii, aby zapobiec wejściu komórek w środkowy lub późny stan stacjonarny. Idealny OD600 dla izolacji fagów wynosi od 0,5 do 0,7.