JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:06 min. • March 31st, 2026
Zacznij od unieruchomionego, rozciętego pęcherza mysiego wcześniej zakażonego uropatogennym E. coli ekspresującym β-galaktozydazę, umieszczonego w wielodołkowej płycie pokrytej silikonem.
Lumen pęcherza skierowany jest do góry, odsłaniając komórki nabłonkowe zawierające wewnątrzkomórkowe społeczności bakteryjne, czyli IBC.
Przemyj pęcherz buforem, aby usunąć zanieczyszczenia i nieprzylegające bakterie.
Następnie dodaj utrwalacz i inkubuj, aby zachować struktury komórkowe i bakteryjne.
Usuń utrwalacz i umyj buforem.
Następnie myj z buforem zawierającym detergent, aby przeniknąć błony komórkowe i bakteryjne.
Usuń bufor, następnie dodaj roztwór X-gal, podłoża β-galaktozydazy, uzupełniony odczynnikami redoks, i inkubuj.
Do bakterii wchodzą odczynniki X-gal i redoks. β-galaktozydaza rozszczepia X-gal, tworząc bezbarwny pośrednik, który jest utleniany przez odczynniki redoks, tworząc niebieski osad.
Pod mikroskopem rozcinającym, niebieskie kropki w pęcherzu potwierdzają wyniki IBC, wskazując na infekcję dróg moczowych.
Do pomiaru IBC, po pobraniu pęcherza umieszczaj go w silikonowej dołce z płytą 6-dołkową za pomocą PBS i nożyczkami przeciąć na pół.
Używając małych metalowych szpilek umieszczonych
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych