JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:47 min. • March 31st, 2026
Rozpocznij od szkiełka mikroskopu perforowanego i załóż okrągłą biopsję tkanki na przebitym obszarze.
Następnie załóż na niego gumową uszczelkę.
Odwróć i włóż ten zespół do dolnej części metalowej ramy komory perfuzyjnej.
Wyrównaj górną ramę z dolną i zabezpiecz je.
Użyj zacisku, aby potwierdzić jednolitą wysokość komory.
Komora jest połączona z pompą, która z kolei jest podłączona do zbiornika zawierającego bakterie zawieszone w buforze.
Rozpocznij przelewanie zawiesiny bakteryjnej do komory.
Centralna perforacja w zamku umożliwia przedostanie się zawiesiny bakteryjnej do zespołu.
Umożliwia to interakcję między bakteriami a powierzchnią tkanki, sprzyjając adhezji i kolonizacji.
Takie rozwiązanie generuje model in vitro , który naśladuje kolonizację bakterii in vivo na tkance.
Aby rozpocząć protokół, umieść wcześniej przygotowaną biopsję tkanki o średnicy 10 milimetrów i tej samej grubości między szkiełkiem mikroskopu a ośmiomilimetrową perforacją okrągłą, a gumową uszczelką z wewnętrzną powierzchnią skierowaną do góry, aby stykała się z zawiesiną bakteryjną.
Skup się na orientacji przeszczepu tkanki podczas umieszczenia w uchowaku. Upewnij się, że wewnętrzna powierzchnia tkanki jest już wystawiona na krew skierowana do góry, aby nawiązać kontakt z ośrodkiem eksperymentalnym.
Następnie włóż uchwyt z chusteczką do folii uszczelki, która jest osadzona w dolnej metalowej ramie komory.
Przymocuj górną metalową ramę wraz z odpowiednią uszczelką do dna komory za pomocą wcześniej włożonego uchwytu na chusteczkę. Następnie zamontuj całą komorę za pomocą ośmiu śrub i nakrętek. Upewnij się, że wysokość komory jest zawsze taka sama dla wszystkich szczepów, używając zacisku lub linijki.
Następnie podłącz komorę przepływową z pompą perystaltyczną. Następnie podłącz zbiornik płynu 400 mililitrów z rurkami. Przekręć tkanki 100-mililitrowymi zawiesinami po dziesięć do siedmiu fluorescencyjnie znakowanych kolonii tworzących jednostki w soli fodylologicznej buforowanej fosforanem o ogromnym stresie trzech dinów na centymetr kwadratowy i odpowiadającym przepływie czterech mililitrów na minutę przez jedną godzinę, używając pompy perystaltycznej i zbiornika bakteryjnego. Ciągłe recyrkulowanie 100-mililitrowej zawiesiny bakteryjnej przy użyciu tego samego zbiornika zbiorowego.