Dostarczanie rekombinowanych klonów wirusowych za pośrednictwem agrobakterii do siewek kukurydzy w celu wyciszenia genów

Zacznij od siewek kukurydzy rosnących w kontrolowanych warunkach, które będą służyć jako żywiciel.

Następnie weź Agrobacterium tumefaciens, bakterię patogenną dla roślin.

Bakterie inżynieryjne noszą konstrukcję T-DNA kodującą rekombinowany genom wirusa. Ten genom zawiera włożony fragment genu zaprojektowany do uciszenia docelowego genu kukurydzy.

Wstrzyknij bakterie tuż nad węzłem koleoptylarnym, najniższym w roślinie, aż zawiesina wypełni koleoptyl, zapewniając dostarczenie do tkanek wewnętrznych.

W miejscu iniekcji bakterie przenoszą T-DNA przenoszące genom wirusa do komórek kukurydzy, gdzie jest ono transkrybowane do wirusowego RNA, które przechodzi do cytoplazmy.

RNA replikuje się i wywołuje produkcję białek wirusowych, tworząc nowe cząstki wirusa, które rozprzestrzeniają się systemowo, prowadząc do zakażenia.

RNA wirusa niosące pożądany fragment genu aktywuje mechanizm interferencyjny RNA rośliny, degradując specyficzne mRNA kukurydzy i wyciszając gen docelowy.

Skutkuje to widocznymi zmianami fenotypów regulowanymi przez gen docelowy w miarę wzrostu zakażonych roślin, takimi jak powstawanie martwiczych zmian, potwierdzających skuteczne wyciszanie genów.

Do wstrzykiwania Agrobacterium