JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:30 min • February 26th, 2026
Zacznij od płytek bioase, z których jedna jest wcześniej skolonizowana po lewej stronie agaru odżywczego Corynebacterium propinquum , a druga zawiera wyłącznie agar odżywczy.
Następnie weź wielodołkowy płytk zawierający patogenną zawiesinę gronkowca .
Opuszczaj znaczek szczepionkowy do studni, którego końcówki zanurzają się w kulturze gronkowca .
Zakręć stempelem, następnie podnieś i sprawdź, czy każdy koniec ma jednolitą kroplę, aby zapewnić regularne szczepienie.
Wyrównaj pieczątkę z prawą stroną płytki bioassay, unikając kontaktu z istniejącymi koloniami.
Usuń stempel, pozostawiając plamy Staphylococcus inoculum na agarze.
Powtórz stemplowanie na samej płycie agarowej, aby uzyskać monokulturę. Inkubuj płytki do góry nogami.
W kokulturze C. propinquum wydziela siderofory, małe cząsteczki pochłaniające żelazo z agaru, hamując tym samym wzrost gronkowca .
Po inkubacji porównaj wzrost gronkowca w kokulturze i monokulturze.
Znaczące hamowanie w współkulturze sugeruje interakcję między tymi dwoma gatunkami.
Po sześciodniowej inkubacji płytki bioasea, przygotuj nocne hodowle organizmu docelowego, jak opisano wcześniej. Przygotuj płytę docelową, wypełniając każdą jamkę pustej płytki 12-dołkowej 1,8 mililitra BHI oraz 200 mikrolitrami celu nocnej hodowli. Umieść sterylny stempel szczepień na tarczy tarczy.
Delikatnie mieszaj kulturami wokół studni, upewniając się, że nie zanieczyszczają sąsiednich studni. Podnieś pieczątkę szczepionkową i upewnij się, że na każdym końcu znajduje się kropla rozcieńczonej kultury docelowej. Umieść pieczątkę szczepionkową na nienałożonej płytki bioaseasu i delikatnie kołysząc pieczątkę, aby kropla hodowla zaszczepiła każdy dołek.
Po usunięciu pieczątki powinna być widoczna kropla hodowli w dołkach. Jeśli żadne dołki nie są zaszczepione pieczątką inokulacyjną, nałóż 3 mikrolitry rozcieńczonej kultury nocnej na dołki za pomocą pipety. Następnie zaszczep płytki bioasea, jak opisano wcześniej, ale końcówki stempla wyrównuj z prawą stroną płytki z 12 dołkami, aby pieczątka nie miała kontaktu z istniejącą kolonią bakterii. Ostrożnie zdejmij stempel i włóż go z powrotem do tarczy docelowej.
Jeśli agar stwardniał w dołkach nierówno, delikatnie kołysać stempelem tam i z powrotem, ale uważaj, aby nie przesunąć stempla w stronę wzrostu organizmu testowego.
Powtarzaj szczepienie dla każdej płytki bioaseju, aż wszystkie płyty zostaną zaszczepione, a następnie inkubuj płytki do góry nogami w odpowiedniej temperaturze przez siedem dni.
Po tygodniu współhodowli testu i organizmu docelowego, oceniaj interakcje na podstawie oceny wzrokowej. Oceniaj studnie wzrostem organizmu docelowego, który wykazuje nieodróżnialny wzrost od monokultury, jako zerowy. Ocenuj studnie o zmniejszonym wzroście jako jeden, a brak wzrostu jako dwa.