Obrazowanie fluorescencyjne kolonizacji bakteryjnej w tkance nerek myszy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:43 min. • March 31st, 2026
Zacznij od nerki myszy zakażonej przez zmodyfikowane bakterie Gram-dodatnie, które kolonizują tkankę i tworzą zmiany.
Wszystkie komórki bakteryjne wykazują czerwoną fluorescencję, podczas gdy specyficzne dla zmian warunki gospodarza umożliwiają ekspresję zielonego białka fluorescencyjnego w określonych komórkach.
Lecz nerkę środkiem utrwalającym i inkubuj w ciemności, aby zachować strukturę tkanek i częściowo przepuścić błony komórkowe.
Osadz narząd w odpowiednim medium, zamroź i podziel na cienkie plasterki tkanki.
Umieść plasterek na naładowanym szklanym szkiełku dla przyczepności.
Pokoloruj tkankę barwnikiem jądrowym.
Barwnik przenika przez komórki gospodarza i bakterii oraz wiąże się z DNA.
Załóż pokrywkę na tkankę i obserwuj preparat pod mikroskopem fluorescencyjnym, używając określonych kanałów obrazowania.
Barwienie jądrowe wyznacza DNA gospodarza i bakterii.
Wszystkie bakterie w tkance wykazują czerwoną fluorescencję, natomiast zielona ekspresja wskazuje na miejsce interakcji gospodarz-patogen.
W odpowiednim momencie eksperymentalnym pobierz nerkę, serce, wątrobę, płuca i śledzionę do 15-mililitrowych probarek polipropylenowych zawierających 10% buforowanej formaliny na inkubację trw
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych