JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:33 min. • February 26th, 2026
Zacznij od płytek zawierających bakterie przyczepione do powierzchni oraz planktoniczne lub swobodnie unoszące się bakterie.
Dodaj komórki ameby do obu próbek.
Na każdą próbkę umieść agarozową płatkę zawierającą Calcein-AM, barwnik przepuszczający komórki.
Usuń nadmiar płynu, pozwól wyschnąć i inkubuj płytki.
Na płytce z bakteriami przyczepionymi do powierzchni, kontakt powierzchniowy zwiększa ekspresję genów zjadliwości, wyrażając toksyny.
Toksyny te zakłócają błonę ameby i zmieniają jej kształt.
Uszkodzona błona ameba pozwala większej ilości kalceiny-AM na przedostanie się do cytoplazmy, gdzie wewnątrzkomórkowe esterazy rozszczepiają ją na fluorescencyjną kalceinę, prowadząc do jej akumulacji.
Natomiast bakterie planktonowe, które nie mają kontaktu z powierzchnią, pozostają niezjadliwe, pozostawiając błony ameb nienaruszone. To zmniejsza wejście kalceiny-AM do ameby, ograniczając nagromadzenie kalceiny fluorescencyjnej.
Zdrowe ameby również pochłaniają bakterie niezjadliwe.
Pod mikroskopem fluorescencyjnym jasne, zaokrąglone komórki ameby wskazują na zjadliwą interakcję bakteryjną, natomiast słabe, amorficzne ameby wskazują na niezjadliwe interakcje bakteryjne.
Aby ocenić zjadliwość komórek bakteryjnego przyczepionych do powierzchni, należy dodać 10 mikrolitrów komórek ameby z wcześniej uzyskanych komórek bakteryjnych przyczepionych na powierzchnię.
Aby wyizolować komórki planktonowe, należy przenieść 10 mikrolitrów hodowli do świeżej szalki Petriego.
Następnie przeanalizuj zjadliwość komórek planktonowych, mieszając 10 mikrolitrów komórek ameby z wcześniej uzyskanymi bakteriami planktonowymi.
Natychmiast połóż mały podkład agarowy na odpowiednią mieszankę bakterii i ameb na powierzchni szalki Petriego.
Następnie usuń nadmiar płynu, delikatnie pipetując, i pozwól naczyniu wyschnąć przez 20 minut.
Przykryj naczynie pokrywką i inkubuj je w temperaturze pokojowej przez dodatkowe 40 minut. Na koniec użyj mikroskopu fluorescencyjnego, aby uzyskać obrazy co najmniej 100 komórek ameb.