Konfokalne obrazowanie biofilmów bakteryjnych indukowanych przez filtry plwociny u pacjentów z mukowiscydozą
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:32 min. • February 26th, 2026
Inkubuj komorowe szkło pokrywkowe zawierające przyklejone bakterie w podłożu uzupełnionym filtratem plwociny pochodzącym z mukowiscydozy oraz wyłącznie w podłożu.
Filtrat plwociny zawiera składniki pochodzące od gospodarza, które stymulują bakteryjne szlaki sygnalizacyjne, wywołując produkcję matrycy i tworzenie biofilmu.
Po utworzeniu biofilmów odrzuć medium zawierające wolno unoszące się bakterie oraz pozostałe składniki pochodzące od gospodarza.
Umyj z buforem, aby usunąć luźno przylegające bakterie.
Dodaj mieszankę barwiącą zawierającą fluorescencyjne barwniki przepuszczalne i nieprzepuszczalne przez błony i inkubuj w ciemności.
Błonowoprzepuszczalny barwnik przecina nienaruszone błony, oznaczając zarówno bakterie żyjące, jak i nieżywotne. Natomiast nieprzepuszczalny barwnik przenika tylko do uszkodzonych błon, selektywnie oznaczając bakterie niezdolne do życia.
Po inkubacji usuń roztwór barwiący i przepłucz buforem, aby wyeliminować nadmiar barwnika i zmniejszyć fluorescencję tła.
Dodaj świeże medium i wykonuj zdjęcia za pomocą mikroskopii konfokalnej.
Biofilmy uprawiane z filtratem plwociny wykazują zwiększoną grubość, podkreślając rolę składników pochodzących od gospodarza w tworzen
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych