JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:48 min. • March 31st, 2026
Zacznij od czerwonego fluoroforu oznaczonego M. antygeny gruźlicy unieruchomione na polimerowej pokrywce.
Dodaj bufor blokujący blokujący nieokreślone miejsca wiązania. Umyj, żeby usunąć nadmiar blokera.
Wprowadź całkowite białko ekstrahowane z ludzkich makrofagów, w tym receptor powierzchniowy komórki, który jest przedmiotem zainteresowania. Inkubuj.
Receptory makrofagów wiążą się z unieruchomionymi antygenami bakteryjnymi.
Dodaj łącznik krzyżowy, aby ustabilizować kompleksy receptor–antygen, a następnie chłodnik neutralizujący niezareagowane łączniki.
Umyj i dodaj drugi łącznik, aby wzmocnić kompleksy.
Umyj jeszcze raz. Następnie zdejmij pokrywkę i odwróć ją na roztwór przeciwciał pierwotnych.
Przeciwciała wiążą się z receptorem makrofagów zainteresowanych.
Opłucz i odwróć pokrywę na zielony roztwór przeciwciał wtórnych sprzężonych z fluoroforem, który wiąże się z przeciwciałami pierwotnymi.
Umyj i zamontuj pokrywkę.
Zwizualizuj próbkę pod mikroskopem fluorescencyjnym. Współzlokalizowane sygnały czerwone i zielone potwierdzają interakcję między receptorem makrofagów a antygenem bakteryjnym.
Za pomocą chirurgicznych pęsety o okrągłym nosku umieść 12-milimetrowe okrągłe pokrywki do dołków pły
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych