JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:32 min • March 31st, 2026
Zacznij od sadzonek Arabidopsis thaliana hodowanych na niskiej gęstości siatkowych podporach, które unoszą się na powierzchni płynnego podłoża w bezglebowym systemie.
Te siewki zostały wcześniej zaszczepione bakteriami, które kolonizują korzenie i tworzą biofilm.
Trzymaj sadzonkę i delikatnie ściśnij łodygę poniżej liści kleszczemi.
Następnie podnieś sadzonkę z siatki, nie uszkadzając korzenia, zachowując skolonizowaną strukturę korzeniową.
Przenieś sadzonkę na wielodołową płytę zawierającą wodę podwójnie destylowaną.
Przykryj płytkę folią i sonikuj próbki za pomocą wielozębnego sonikatora, aby rozbić biofilm i usunąć bakterie z powierzchni korzenia.
Po sonikacji użyj sonikowanej zawiesiny bakteryjnej do przygotowania serii rozcieńczeń.
Rozcieńczone próbki nakładaj na płytki agarowe i dodaj szklane kulki, aby równomiernie rozprowadzić bakterie.
Usuń kulki i inkubuj płytki, aby umożliwić powstawanie kolonii żywotnym bakteriom.
Tworzenie kolonii potwierdza udane kolonizowanie korzeni przez bakterie w systemie bezglebowym.
Po płukaniu usuń siewki z siatki, delikatnie umieszczając pod liściami po stronie liścia pod ostrzałem sterylizowane kleszcze. Delikatnie ściśnij łodygę i przesuń sadzonki w górę i z dala od siatki, aby usunąć korzeń bez jego łamania. Aby usunąć bakterie z korzeni roślin, przenieś siewki z każdej siatki do indywidualnych dołków 24-dołkowej płyty sonikacyjnej zawierającej jeden mililitr podwójnie destylowanej wody.
Sonikuj wszystkie próbki na płycie jednocześnie, używając wielozaczewowego sonikatora, jak opisano w rękopisie. Aby ilościowo określić bakterie, wykonaj seriowe 10-krotne rozcieńczenia sonikowanych próbek w ośrodku wzrostu bakterii. Rozprzestrzeniaj się za pomocą sterylnych szklanych koralików i inkubuj w optymalnej temperaturze dla bakterii, aż poszczególne kolonie będą liczalne.