Wykrywanie podatności na antybiotyki bakteryjne za pomocą stymulowanego mikroskopu rozpraszającego Ramana

Zacznij od próbek bakteryjnych wcześniej obtraktowanych rosnącym stężeniem antybiotyku, który eliminuje podatne bakterie.

Do odpowiednich probówek dodaj podłoże wzrostu zawierające tlenek deuteru i to samo stężenie antybiotyku.

Inkubuj rurki w warunkach drżących.

Tlenek deuteru wnika do komórek bakteryjnych, gdzie deuter zostaje włączony do nowo zsyntetyzowanych biomolekuł, tworząc wiązania węgiel–deuter.

Rozprowadź bakterie, wyrzuć supernatant i umyj.

Dodaj utrwalający, aby zachować strukturę bakterii.

Dodaj wodę, wiruję i usuń supernatant.

Ponownie zawiesnij bakterie i przenieś zawiesinę na szkło pokryte poli-L-lizyną, a następnie je uszczelnić.

Umieść próbkę na stole prekalibrowanego mikroskopu stymulowanego Ramana lub SRS. Dodaj wodę i obniż cel.

Zrób zdjęcia wielu pól w celu oceny częstotliwości drgań węgla i deuteru.

Przy wyższych stężeniach antybiotyków sygnał węgiel–deuter maleje, co wskazuje na obniżoną żywotność bakterii.

Umożliwia to szybką ocenę podatności na antybiotyki poprzez korelację intensywności sygnału SRS z żywotnością bakterii.

Po godzinie inkubacji należy dodać 700 mikrolitrów antybiotyku szerejnie rozcieńczonego z 100% deuterem zawierającym podłoże MHB do 300 mikrolitró