Ustanowienie infekcji bakteryjnej u larw Drosophila

Weź kroplę patogenu bakteryjnego na folię parafinową.

Umieść larwę Drosophila w kropli bakteryjnej.

Pod stereomikroskopem użyj igły wolframowej, aby nakłuć larwę i przekłuć jej skórek, ochronną warstwę zewnętrzną oraz naskórek pod spodem.

Pozwala to bakteriom dostać się do larwalnej hemolimfy, czyli płynu krążenia.

Przenieś zainfekowane larwy na rowkowaną, bogatą w składniki odżywczą płytkę agarową, zawierającą pastę drożdżową jako źródło pożywienia.

Rowki ułatwiają migrację larw i zapobiegają odwodnieniu.

Dodaj pozostałą zawiesinę bakteryjną na płytę i zabezpiecz ją folią parafinową.

Inkubuj płytkę w wilgotnej komorze, aby utrzymać żywotność larw.

Wewnątrz larwalnej hemolimfy komórki odpornościowe zwane hemocytami wykrywają bakterie i inicjują fagocytozę.

Podczas gdy niektóre bakterie są eliminowane po fuzji fagosom–lizosom, inne przetrwają, opóźniając fuzję lub opierając się stresowi wewnątrzkomórkowemu i replikują się w hemocytach, prowadząc do długotrwałej infekcji wewnątrzkomórkowej.

Zakażone Drosophila larvae są teraz gotowe do badań interakcji gospodarz z patogenem.

Na talerzu agaru z soku winogronowego nałóż pastę drożdżową. Wykonaj drobne cięcie w agarze, gdzie larwy mogą się przemie