JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:29 min. • March 31st, 2026
Weź kroplę patogenu bakteryjnego na folię parafinową.
Umieść larwę Drosophila w kropli bakteryjnej.
Pod stereomikroskopem użyj igły wolframowej, aby nakłuć larwę i przekłuć jej skórek, ochronną warstwę zewnętrzną oraz naskórek pod spodem.
Pozwala to bakteriom dostać się do larwalnej hemolimfy, czyli płynu krążenia.
Przenieś zainfekowane larwy na rowkowaną, bogatą w składniki odżywczą płytkę agarową, zawierającą pastę drożdżową jako źródło pożywienia.
Rowki ułatwiają migrację larw i zapobiegają odwodnieniu.
Dodaj pozostałą zawiesinę bakteryjną na płytę i zabezpiecz ją folią parafinową.
Inkubuj płytkę w wilgotnej komorze, aby utrzymać żywotność larw.
Wewnątrz larwalnej hemolimfy komórki odpornościowe zwane hemocytami wykrywają bakterie i inicjują fagocytozę.
Podczas gdy niektóre bakterie są eliminowane po fuzji fagosom–lizosom, inne przetrwają, opóźniając fuzję lub opierając się stresowi wewnątrzkomórkowemu i replikują się w hemocytach, prowadząc do długotrwałej infekcji wewnątrzkomórkowej.
Zakażone Drosophila larvae są teraz gotowe do badań interakcji gospodarz z patogenem.
Na talerzu agaru z soku winogronowego nałóż pastę drożdżową. Wykonaj drobne cięcie w agarze, gdzie larwy mogą się przemieszczać, aby uniknąć wyschnięcia.
Złóż igłę wolframową o średnicy 0,001 milimetra z kleszczami trzymającymi za pomocą folii parafinowej. Pipeta 50 mikrolitrów wysokomianielowego, mCherry-ekspresującego C. Burnetii na folię parafinową pod mikroskopem stereo i umieść larwy w kałuży bakterii. Nakłuj larwy igłą wolframową.
Przenieś larwy na płytkę agarową. Przelej pozostałe medium patogenowe na płytę agarową i zabezpiecz ją folią parafinową. Larwy trzymaj na talerzu na wilgotnym powietrzu aż do pożądanego czasu po infekcji. Zostaw C. Burnetii zakażał larwy na talerzu przez 24 godziny.