Wysokorozdzielcze obrazowanie konfokalne hemocytów Drosophila zakażonych patogenami
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:35 min. • March 31st, 2026
Umieść szkiełko zawierające ustalone hemocyty na stole mikroskopu konfokalnego.
Hemocyty te pochodzą z larw Drosophila melanogaster i zostały zainfekowane patogenem bakteryjnym.
Hemocyty są oznaczane zielonym białkiem fluorescencyjnym, ich jądra barwione są niebieskim barwnikiem, a bakterie wyrażają czerwone białko fluorescencyjne dla wizualizacji.
Skonfiguruj mikroskop tak, aby wykrywał wszystkie trzy fluorofory i jednocześnie śledził przedziały komórkowe i patogeny.
Korzystając z obiektywu o wysokiej rozdzielczości, skup się na docelowym hemocycie, aby uchwycić szczegóły subkomórkowe.
Dostosuj moc lasera i wzmocnienia detektora, aby uzyskać odpowiednią ekspozycję próbki i zoptymalizować klarowność sygnału.
Zeskanuj wiele płaszczyzn Z, aby upewnić się, że poziom ekspozycji jest odpowiedni.
Ustaw górną i dolną pozycję Z, aby obrazować cały hemocyt.
Użyj skanującego zoomu, aby wyizolować interesujący nas hemocyt i uzyskać obraz 3D o wysokiej rozdzielczości.
Metoda ta umożliwia wizualizację lokalizacji patogenów w obrębie hemocyta.
Konfiguruj mikroskop konfokalny do trójkolorowego obrazowania DAPI, EGFP i mCherry.
Umieść próbkę na mikroskopie i skup się na niej za pomocą obiektywu o aperturze 6
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych