JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:36 min. • March 31st, 2026
Weź zawiesinę patogennej bakterii wyizolowanej z zakażonej rośliny.
Genom bakteryjny zawiera fuzję transkrypcyjną, w której promotor genu regulującego zjadliwość również napędza ekspresję genu fluorescencyjnego bez promotoru.
Podczas infekcji roślin aktywacja promotora wywołuje produkcję białek regulacyjnych i fluorescencyjnej.
Białko regulacyjne aktywuje geny zjadliwości, podczas gdy fluorescencja zapewnia mierzalny odczyt aktywacji zjadliwości.
Wiruj ogniwa, odrzucaj supernatant, a następnie ponownie zawiesaj, aby uzyskać skoncentrowaną zawiesinę.
Umieść kroplę na slipie i nałóż agarozową podkładkę, aby rozprzestrzenić i unieruchomić komórki.
Wykonaj obraz jasnego pola, aby zidentyfikować wszystkie komórki bakteryjne, a następnie obraz fluorescencyjny, aby wykryć fluorescencję pojedynczych komórek.
Połącz oba, aby zwizualizować różnice intensywności fluorescencji, które ujawniają subpopulacje z wysoką, niską lub żadną ekspresją genów zjadliwości.
Ta zmienność fenotypowa odzwierciedla strategię adaptacyjną, która zwiększa przeżywalność bakterii podczas kolonizacji roślin.
Do analizy pojedynczej komórki przygotuj roztwór agarozy 1,5% w wodzie destylowanej. Po stopieniu dodaj tyle objętości,
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych