JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:44 min • March 31st, 2026
Zacznij od wkładki Transwell zawierającej współhodowlę komórek nabłonkowych i pucharowych.
Komórki nabłonkowe tworzą ciasne połączenia, natomiast komórki przypominające kielich produkują śluz, naśladując barierę nabłonkową in vivo.
Weź zawiesię społeczności bakteryjnej jamy ustnej, która została poddana symulacji płynu jelitowego, aby naśladować trawienie jelita cienkiego.
Zamień podłoże w górnej komorze na zawiesinę bakteryjną.
Inkubuj z potrząsaniem, aby ułatwić zgęcenie i internalizację bakterii.
Zbieraj podłoże z górnej komory zawierającej nieprzylegające bakterie do kolejnych testów żywotności.
Dodaj roztwór rozpuszczający śluz i inkubuj, aby rozpuścić śluz i uwolnić przyklejone bakterie.
Zbierz roztwór do dalszej analizy żywotności bakterii i przyczepności.
Umyj komórki buforem i dodaj detergent, żeby je usunąć.
Zbierz zawiesinę komórkową.
Wykonaj zawiesinę w wirze, aby zlikwidować komórki i uwolnić zinternalizowane bakterie.
Wirówka i zbieranie supernatantu oraz odpadów komórkowych osobno do dalszej analizy.
Po umyciu i dostosowaniu gęstości komórek trawienia jelita cienkiego zgodnie z protokołem tekstowym usuń ośrodek wierzchołkowy z systemu przejściowego i dodaj 1,5 mililitra zawiesiny bakteryjnej.
Współhodować system w ogólnych warunkach hodowli komórkowej przez 2 godziny. Dodaj 0,5 mililitra 10-milimolowej n-acetylocyteryny w HBSS, aby rozpuścić śluz produkowany przez HT29-MTX i odzyskać przyklejone bakterie.
Inkubuj płytki w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 1 godzinę pod poruszeniem. Odzyskaj NAC-HBSS w rurce mikrowirówki i użyj 1 mililitra DPBS do dwukrotnego przemycia komórek. Dodaj 0,5 mililitra 0,5% trytona X-100 na monowarstwy i rozbij komórki przez pipetowanie.
Następnie szybko odzyskaj płyn w wirze na 1 minutę. Szybkość jest kluczowa, aby nie uszkadzać komórek bakteryjnych przez detergent. Analizuj próbki zgodnie z protokołem tekstowym.