Ekstrakcja całkowitego DNA z liści w celu wykrywania infekcji bakteryjnej

0 wyświetleń5:12 min • March 31st, 2026

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zacznij od małych kawałków schłodzonej tkanki liściowej, w których łyk jest zainfekowany patogenem bakteryjnym.

Umieść kawałki w moździerzu z ciekłym azotem, aby zahamować aktywność nukleaz rozkładających DNA.

Miel, aby mechanicznie rozbić komórki i uwolnić składniki wewnątrzkomórkowe.

Użyj schłodzonej łopatki, aby przenieść proszek, dodać bufor lizowy i zawortować zawiesinę.

Inkubować do lizowania jąder roślin i komórek bakteryjnych, uwalniając DNA i RNA podczas denaturacji białek.

Dodaj RNazę i inkubuj, aby rozłożyć RNA.

Dodaj bufor wydzielania białek, aby zagregować białka, a następnie wiruj je, aby je rozdzielić.

Przenieś supernatant zawierający DNA roślin i bakteryjnych do izopropanolu, aby wytrącić DNA w formie nici nici.

Wirówka, aby pobrać DNA i usunąć supernatant.

Przemyj etanolem, potem wiruj i wyrzuć supernatant.

Susz DNA na powietrzu, następnie dodaj bufor rehydracyjny i inkubuj ją, aby je rozpuścić.

Próbki DNA są już gotowe do dalszego wykrywania patogenów za pomocą PCR.

Użyj czystych nożyczek, aby odciąć cały świeży liść z drzewa cytrusowego i włożyć go do czystej plastikowej torebki na kanapki. Następnie schłodzić moździerz, dodając niewielką ilość ciekłego azotu. Następnie użyj nożyczek, aby wyciąć małe kawałki tkanki liścia, około jednego cala kwadratowego.

Włóż kawałki liści do zaprawy, aby natychmiast je zamrozić. Szybko zacznij mielić tkankę liściową moździerzem, aż ciekły azot odparuje i pozostanie drobny zielony proszek. Następnie schłodzić metalową łopatkę w ciekłym azocie przez 10 do 15 sekund. Następnie użyj zimnej łopatki, aby pobrać zmieloną tkankę z moździerza w rurce mikrowirówki o pojemności 1,5 mililitra. Użyj pipety o pojemności 1000 mikrolitrów, aby dodać 600 mikrolitrów roztworu lizy jąder do próbki. Następnie zawortkuj próbkę przez jedną do trzech sekund. Inkubuj rurkę w temperaturze 65 stopni Celsjusza w kąpieli wodnej przez 15 minut.

Po zakończeniu okresu inkubacji użyj pipety o pojemności 10 mikrolitrów, aby dodać 3 mikrolitry roztworu RNazy do lizatu, aby usunąć RNA. Następnie wymieszaj zawartość rurki, odwracając ją dwa do pięciu razy. Inkubuj w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 15 minut w inkubatorze szafkowym. Po 15 minutach dodaj do próbki 200 mikrolitrów roztworu wytrącania białka. Uruchom rurę z dużą prędkością przez 20 sekund.

Następnie wiruj próbkę w 13000 g przez 3 minuty. W trakcie wirowania należy dodać 600 mikrolitrów izopropanolu utrzymywanego w temperaturze pokojowej do nowej rurki mikrowirówki o pojemności 1,5 mililitra. Po zakończeniu wirowania ostrożnie usuń supernatant z rurki wirówki do rurki zawierającej izopropanol. Wyrzuć granulkę.

Odwróć rurkę, aby DNA było widoczne jak nitkowata. Następnie odwiruj próbkę w 13000 g przez minutę w temperaturze pokojowej.

Przelej supernatant po wirówce. Następnie dodaj 600 mikrolitrów 70% etanolu do pelletu. Odwróć rurkę kilka razy, aby umyć granulkę. Wiruj probówkę na 13000 g przez 1 minutę. Po zakończeniu wirowania ostrożnie zasysaj supernatant. Następnie odwróć tubkę z otwartą pokrywką na chłonnym papierze, aby wyschła na powietrzu przez 15 minut. Po wyschnięciu dodaj do pelletu 100 mikrolitrów roztworu rehydratacyjnego DNA. Inkubuj zawiesinę DNA w temperaturze 65 stopni Celsjusza w kąpieli wodnej przez godzinę.

11:30

Rozwikłanie funkcji efektora bakteryjnego od nienadającego się do uprawy patogenu roślinnego za pomocą drożdżowego sita dwuhybrydowego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:56

Oczyszczanie genomowego DNA o wysokiej masie cząsteczkowej z mączniaka prawdziwego do sekwencjonowania z długim odczytem

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:53

Izolacja, charakterystyka i całkowita ekstrakcja DNA w celu identyfikacji grzybów endofitycznych w roślinach mykoheterotroficznych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:08

Wykrywanie modyfikacji histonów w liściach roślin

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

05:43

Ekstrakcja DNA genomowego z tkanek liści roślin zakażonych bakteriami patogennymi

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:50

Test infiltracji bakteryjnych liści w celu dokładnej charakterystyki reakcji obronnych roślin przy użyciu patosystemu Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

12:33

Optymalizacja i analiza porównawcza metod wzbogacania organelek DNA roślin odpowiednich do sekwencjonowania nowej generacji

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:23

Specyficzne i dokładne wykrywanie patogenu zazieleniania cytrusów Candidatus liberibacter spp. za pomocą konwencjonalnego PCR na próbkach tkanek liści cytrusów

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:55

Badanie mikrobiomu korzeni: ekstrakcja danych o społeczności bakteryjnej z gleby, ryzosfery i endosfery korzeni

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:56

Połączenie analizy DNA w surowej ekstrakcji wirionu z analizą RNA z zakażonych liści w celu odkrycia nowych genomów wirusów

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 15 sierpnia 2026