Analysis of Macrophage Receptor Interactions with Pathogenic Bacteria Using Flow Cytometry

JoVE Encyclopedia of Experiments

Mikrobiologia

0 wyświetleń • 2:26 min • July 1st, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Begin with a tube of macrophage protein extract containing host immune receptors.

Add inactivated pathogenic bacteria to provide surface antigens specific to pathogenic strains.

Incubate with rotation to enable immune receptors to bind bacterial antigens, forming receptor–antigen complexes.

Add a crosslinking agent and incubate with shaking to stabilize receptor–antigen complexes.

Introduce a quenching agent to stop the crosslinking reaction.

Add buffer and centrifuge to pellet the complexes.

Remove excess reagents, then resuspend the pellet in a second crosslinking agent to further stabilize the complexes.

Centrifuge and wash the pellet with buffer.

Add fluorescently labeled antibodies and vortex.

Incubate under cold, dark conditions to allow antibodies to bind receptor–antigen complexes.

Resuspend the cells in buffer containing serum.

Finally, analyze receptor–antigen complexes using flow cytometry.

As complexes pass through the laser, they emit fluorescence signals that correlate with receptor-antigen binding, highlighting host-pathogen recognition.

Incubate one times 10 to the power of six whole inactivated Mycobacterium tuberculosis cells with 50 microliters of protein extract from one times ten to the power of six macrophages overnight at 4 degrees Celsius in a rotating microtube holder.

The next day, to stain the protein bacteria complex, add the anti-human SLAMF1 antibody to the microtube, vortex the mixture, and incubate overnight for 30 minutes at 4 degrees Celsius in the dark. After washing the protein bacteria complexes with FACS, resuspend them in FACS buffer and acquire the sample on a flow cytometer.

10:29

Wysokoprzepustowy, kompatybilny test do oceny skuteczności leku przeciwko prątkom gruźlicy pasażowanym przez makrofagi

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:43

Polaryzacja ludzkich komórek pochodzących z monocytów M1 i M2 oraz analiza za pomocą cytometrii przepływowej po zakażeniu Mycobacterium tuberculosis

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:27

Przewidywanie znaczenia przeciwciał przeciwko krwinkom czerwonym za pomocą testu monocytów-makrofagów

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

18:07

Analiza internalizacji komórkowej nanocząsteczek i bakterii przy użyciu wielospektralnej obrazującej cytometrii przepływowej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:48

Test fluorescencyjny do badania interakcji receptorów makrofagów z antygenami bakteryjnymi

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

04:21

Analiza cytometrii przepływowej wewnątrzkomórkowych i pojawiających się zewnątrzkomórkowych Listeria monocytogenes in vitro

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:18

Barwienie cytometrią przepływową subpopulacji makrofagów zakażonych Mycobacterium tuberculosis

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:25

Spektrometria mas MALDI-TOF dla całych komórek jest dokładną i szybką metodą analizy różnych trybów aktywacji makrofagów

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:43

Analiza makrofagów pochodzących z mikrogleju i monocytów z ośrodkowego układu nerwowego za pomocą cytometrii przepływowej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

13:20

Pomiar cytometryczny przepływu produkcji ROS w makrofagach w odpowiedzi na sieciowanie FcγR

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 22 sierpnia 2026