JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:22 min. • August 31st, 2026
Rozpocznij od kolby z hodowlą ludzkich komórek embrionalnych nerki w medium bogatym w składniki odżywcze.
Wymień medium na świeże medium zawierające chlorochinę, aby zwiększyć wydajność dostarczania plazmidów do komórek.
Przygotować mieszaninę plazmidów kodujących białka powierzchniowe grypy, białka rdzeniowe lentiwirusa oraz genom lentiwirusa, wraz z fosforanem wapnia. Inkubować w celu utworzenia kompleksów fosforan wapnia–DNA.
Dodaj mieszaninę do komórek i delikatnie wymieszaj. Inkubuj, aby umożliwić kompleksowi wniknięcie do komórek poprzez endocytozę. Chloroquina wspomaga ucieczkę DNA plazmidowego z endosomów.
Wewnątrz komórki DNA plazmidowy steruje ekspresją komponentów zarówno wirusa grypy, jak i lentiwirusa.
Wymień medium, aby usunąć nadmiar kompleksów.
Inkubować, aby umożliwić składnikom wirusowym złożenie się i wypączkowanie w formie pseudowirusów, które są uwalniane do pożywki hodowlanej.
Zebrać pożywkę zawierającą pseudowirusy i odwirować w celu osadzenia resztek komórkowych.
Zebrać supernatant zawierający pseudowirusy i przechowywać go w niskich temperaturach do dalszych analiz.
Na początek należy przygotować zawiesinę pojedynczych komórek HEK 293FT w pełnej pożywce DMEM. Należy
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych