JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:24 min. • August 31st, 2026
Należy rozpocząć od oka myszy transgenicznej, w które wcześniej wstrzyknięto wirusa towarzyszącego adenowirusom (AAV) niosącego interesujący gen kodujący białko fluorescencyjne.
Mysz ta posiada defekt genu niezbędnego do zachowania integralności wewnętrznej błony ograniczającej (ILM), która stanowi barierę oddzielającą siatkówkę od jamy ciała szklistego.
Utrata tego genu naśladuje degenerację siatkówki, co pozwala wirusowi wniknąć głębiej w warstwy komórkowe siatkówki.
Zainfekowane komórki siatkówki wykazują ekspresję badanego genu, produkując białka fluorescencyjne, co pozwala im na fluorescencję.
Następnie przeprowadź dyssekcję oka i usuń rogówkę oraz soczewkę.
Ostrożnie oddziel siatkówkę od nabłonka pigmentowego siatkówki (RPE) oraz twardówki, czyli zewnętrznej warstwy oka.
Zanurzyć tkankę w utrwalaczu.
Przemyć buforem fosforanowym, aby usunąć pozostałości utrwalacza.
W obserwacji pod mikroskopem konfokalnym fluorescencja w komórkach siatkówki wskazuje na skuteczną penetrację wirusową przez uszkodzoną błonę ograniczającą wewnętrzną.
W przypadku preparatów siatkówki w układzie płaskim (flat mounts), ułatwienie sekcji uzyskaj poprzez utrwalenie wyłuskanych gałek ocznych w 4% paraformaldehy
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych