JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 4:12 min. • August 31st, 2026
Rozpocząć od hepatocytów hodowanych na szalce pokrytej kolagenem.
Wprowadzić odczynnik do transfekcji w kompleksie z dwoma plazmidami: jednym zawierającym zmodyfikowany genom wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) oraz drugim kodującym wirusowe białka strukturalne.
Inkubować, aby umożliwić wniknięcie plazmidu. Wewnątrz komórki geny wirusowe ulegają ekspresji w celu produkcji białek strukturalnych i zmodyfikowanego genomu HBV, które łączą się, tworząc rekombinowane cząsteczki HBV.
Wymień medium i inkubuj, aby wspomóc produkcję i uwalnianie cząstek wirusowych.
Zebrać pożywkę i odwirować w celu osadzenia zanieczyszczeń.
Zebrać nadsącz i przefiltrować go w celu usunięcia pozostałych zanieczyszczeń.
Następnie dodaj glikol polietylenowy i chlorek sodu, aby wyprecypitować cząstki wirusowe.
Odwiruj w celu osadzenia zawartości. Rozpuść osad w buforze i odwiruj zanieczyszczenia. Następnie nanieś go na poduszkę sacharozową.
Przeprowadź ultrawirowanie, aby osadzić cząsteczki wirusa przez poduszkę.
Usunąć nadsącz i resuspender osad w pożywce.
Przefiltruj zawiesinę i przechowuj oczyszczony rekombinowany HBV w niskiej temperaturze do dalszych analiz.
Po przygotowaniu pożywki do hodowli komórkowej, w dniu pop
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych