JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:29 min • August 31st, 2026
Należy pobrać larwy komarów z wczesnych stadiów rozwojowych, które są podatne na infekcję wirusową.
Przenieś larwy do zlewki zawierającej wodę dejonizowaną.
Wprowadź rekombinowany densowirus, zaprojektowany w celu kodowania microRNA supresującego docelowe geny larwalne. Inkubuj.
Larwy pobierają wirusa, który następnie dociera do jelita.
Przyjęty wirus przenika przez nabłonek jelitowy i rozprzestrzenia się do innych tkanek.
Wirus wnika do komórek larw poprzez endocytozę i uwalnia swoje DNA do jądra komórkowego.
Wirusowe DNA produkuje mikroRNA.
W cytoplazmie mikroRNA te wiążą się z kompleksem wyciszania indukowanym przez RNA.
Kompleks wiąże i rozcina komplementarne docelowe mRNA larw, zapobiegając ich ekspresji i prowadząc do wyciszenia genu.
Po inkubacji należy przemyć larwy wodą dejonizowaną, aby usunąć niepołknięte cząsteczki wirusa.
Przenieś larwy na nową płytkę z pożywką w celu rekonwalescencji.
Zainfekowane wirusem larwy komarów z wyciszonym genem docelowym są gotowe do dalszych zastosowań.
Przemyj 100 larw A. albopictus pierwszego stadium trzy razy, używając wody dejonizowanej. Następnie przenieś larwy do zlewki zawierającej 95 mililitrów wody dejonizowanej.
Dodaj 5 mL zapasów rAaeDV i inkubuj larwy przez 24 godziny w temperaturze 28 °C. Aby zapewnić pomyślne zakażenie larw, niezbędne jest utrzymanie ich w kontakcie z cząsteczkami wirusa infekcyjnego przez 24 do 36 godzin, co zapewni wysoki stopień zakażeń. Po inkubacji przemyj larwy trzy razy wodą dejonizowaną, a następnie przenieś je z powrotem na płytki. Karmij larwy regularnie.