JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:24 min. • August 31st, 2026
Pobierz probówki zawierające kapsydy wirusowe, które są cząsteczkami wirusopodobnymi pozbawionymi materiału genetycznego.
Ogrzewaj probówki w stałej temperaturze przez różne odstępy czasu.
Krótszy czas ogrzewania powoduje łagodny stres białek kapsydu, natomiast przedłużone ogrzewanie prowadzi do rozpadu kapsydu i wywołuje agregację.
Szybko schłodź probówki, aby zapobiec dalszym zmianom strukturalnym.
Przenieś ciecz na folię parafinową.
Umieść siatkę do transmisyjnej mikroskopii elektronowej (TEM) na kropli. Kapsydy przyczepiają się do powierzchni siatki.
Osusz siatkę papierem filtracyjnym, aby usunąć nadmiar cieczy.
Przemyć buforem, aby usunąć słabo przytwierdzone kapsydy, a następnie ponownie osuszyć siatkę.
Zanurz w octanie uranylu, barwniku z ciężkiego metalu, który wiąże się z powierzchnią kapsydu, sprawiając, że staje się on ciemniejszy w obrazowaniu TEM.
Osusz siatkę i umieść ją na płytce. Przechowuj płytkę w eksykatorem, aby usunąć wilgoć.
Wykonaj obrazowanie siatki przy użyciu TEM, aby zwizualizować uszkodzenia kapsydów wywołane działaniem wysokiej temperatury.
Przeprowadź obróbkę termiczną w sposób opisany wcześniej, zastępując jednak 10 mM HEPES, pH 7,4 roztworem PBS i nie rozcieńcz
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych