JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:28 min. • August 31st, 2026
Pobrać kulturę genetycznie zmodyfikowanych bakterii krętkowców. Bakterie te posiadają gen oporności na gentamycynę.
Dodaj zawiesinę bakteriofagów do kultury bakteryjnej.
Fagi przenoszą plazmidowe DNA kodujące gen oporności na kanamycynę.
Inkubować mieszaninę.
Bakteriofag przyczepia się do powierzchni bakterii i wstrzykuje DNA do wnętrza komórki.
Plazmid replikuje się niezależnie i jest przekazywany podczas podziału bakterii.
Wymieszać inkubowaną kulturę z roztopionym medium agarozowym uzupełnionym o antybiotyki gentamycynę i kanamycynę.
Wlej mieszaninę do płytki. Pozostaw do stężenia, a następnie inkubuj.
W warunkach selekcji podwójnym antybiotykiem rosną i tworzą kolonie tylko komórki posiadające oba markery oporności, natomiast pozostałe komórki giną.
Wybrać kolonię i zaszczepić ją w pożywce zawierającej oba antybiotyki.
Inkubować w celu ułatwienia wzrostu bakterii z przetransdukowanym plazmidem do dalszych analiz.
Zlej nadsącz i zawieś osad w 14,5 milliliters świeżej pożywki BSK. Do kultury klonu biorcy dodaj mniej niż lub równo 500 microliters próbki fagów wytrąconych za pomocą PEG.
Po dokładnym wymieszaniu inkubować w temperaturze 33 °C przez 72 do 96 godzin. Selekcję transduktantów przep
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych