Multipleksowe obrazowanie fluorescencyjne kwasów nukleinowych i białek wirusowych w zakażonych limfocytach ludzkich

Rozpocznij od ludzkich limfocytów zainfekowanych HIV-1 na szkiełku podstawowym z przytwierdzonym szkiełkiem nakrywkowym.

Komórki te zostały poddane hybrydyzacji z sondami, które fluorescencyjnie znakują wirusowe RNA oraz prowirusowe DNA.

Inkubuj komórki w roztworze blokującym, aby zapobiec nieswoistemu wiązaniu przeciwciał.

Należy dodać przeciwciała pierwszorzędowe skierowane przeciwko białku kapsydu HIV-1.

Inkubować, aby umożliwić związanie przeciwciał pierwszorzędowych z białkiem kapsydu.

Przemyj komórki buforem, aby usunąć niezwiązane przeciwciała.

Dodaj przeciwciała wtórne znakowane fluorescencyjnie, które wiążą się z przeciwciałami pierwotnymi.

Wypłucz niezwiązane przeciwciała.

Dodaj barwnik specyficzny dla DNA w celu zabarwienia jąder komórkowych, a następnie wypłucz, aby usunąć nadmiar barwnika.

Zastosuj multipleksowe obrazowanie fluorescencyjne, aby jednocześnie wykryć wirusowe DNA, RNA, białka oraz jądra komórkowe gospodarza w różnych kolorach.

Ta wizualizacja pojedynczych komórek umożliwia badanie różnych etapów cyklu życiowego wirusa poprzez jednoczesną wizualizację wirusowego DNA, RNA i białek w zakażonych komórkach.

W celu immunostainingu białek zainteresowania, po ostatnim przem