JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:36 min. • August 31st, 2026
Zacznij od zawiesiny zawierającej osady intasomów prototypowego wirusa pienistego (PFV), monomerów integraz, oligomerów DNA oraz agregatów białkowych.
Intasomy PFV są tetramerami integraz wirusowych w kompleksie z syntetycznymi oligomerami naśladującymi wirusowe DNA genomowe.
Dodaj roztwór soli do zawiesiny i inkubuj na lodzie. Sól zmniejsza oddziaływania elektrostatyczne między intasomami, umożliwiając rozpuszczenie osadów.
Pipetuj delikatnie w regularnych odstępach czasu, aby wspomóc solubilizację intasomu.
Odwiruj próbkę, abyt sformować pellet z pozostałego osadu, a następnie zbierz nadsącz zawierający rozpuszczalne intasomy.
Należy użyć uprzednio wyrównanej kolumny do chromatografii wykluczania cząsteczkowego wypełnionej kuleczkami sieciowanej agarozy i nałożyć supernatant na kolumnę.
Ze względu na swoje duże rozmiary, agregaty białkowe i intasomy omijają pory kulek i eluują wcześniej.
Mniejsze monomeryczne integrazu i oligomery wnikają w pory kulek i eluują później.
Zabierz wczesne frakcje elucyjne zawierające intasomy do dalszych analiz.
Przygotuj dwa końce do pipet o szerokim otworze, odcinając od 2 do 4 mm z końcówki tipa 20 µL za pomocą nowej żyletki lub ostrza skalpela na czystej
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych