JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:23 min. • August 31st, 2026
Zacznij od seryjnie rozcieńczonego, syntetycznego roztworu standardu viralnego RNA w medium hodowlanym.
Rozcieńczenia te służą jako standardy referencyjne do ilościowego oznaczenia viralnego RNA w próbkach.
Następnie pobierz nadsącz zawierający wirusa z hodowli komórek zainfekowanych wirusem.
Ta pożywka zawiera inhibitor, który wiąże enzymy degradujące RNA i zapobiega rozpadowi wirusowego RNA.
Dodać bufor do obróbki zawierający enzym proteinazę K.
Krótko odwiruj roztwór w celu dokładnego wymieszania.
Umieść płytkę PCR zawierającą próbki w termocyklerze.
W pierwszej kolejności inkubuj w umiarkowanej temperaturze, aby aktywować proteinazę K.
Enzym ten trawi białka wirusowe kapsydujące genom, uwalniając viralne RNA do roztworu.
Następnie inkubuj w wyższej temperaturze, aby dezaktywować enzym i zdenaturować RNA.
Na koniec przetworzone próbki należy przechowywać w warunkach chłodniczych do czasu przeprowadzenia analizy ilościowej PCR w czasie rzeczywistym.
W pierwszej kolejności wymieszaj 199 µL buforu do przetwarzania z 1 µL proteinazy K wolnej od nukleaz. Używając pożywki do hodowli komórkowej, wykonaj rozcieńczenia seryjne przygotowanego RNA 3’UTR wirusa Dengue w stosunku 1:10, aby uzyskać stan
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych