JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:52 min. • August 31st, 2026
Rozpocznij od hodowli ludzkich komórek raka wątroby przetransfekowanych RNA wirusa zapalenia wątroby typu E (HEV) w celu produkcji cząsteczek wirusowych.
Niektóre cząsteczki HEV nabywają pochodzącą od gospodarza błonę endosomalną i opuszczają komórkę, podczas gdy inne pozostają wewnątrz niej jako nieotoczkowane cząsteczki HEV.
Aby zebrać zewnątrzkomórkowe HEV, należy zebrać i przefiltrować nadsącz z hodowli w celu usunięcia resztek komórkowych.
Przechowywać w ultra-niskiej temperaturze, aby zachować zakaźność.
Aby zebrać wewnątrzkomórkowe cząstki HEV, należy przemyć komórki buforem.
Dodaj trypsynę-EDTA, aby odkleić komórki, a następnie dodaj pożywkę, aby zatrzymać aktywność enzymatyczną.
Przenieś zawiesinę do probówki i odwiruj.
Odlać nadsącz zawierający pozostałości trypsyny. Resuspendować osad i przenieść go do probówki.
Zamrozić komórki w ciekłym azocie, a następnie rozmrozić je na lodzie.
Powtórz cykle zamrażania i rozmrażania, aby zlizować komórki i uwolnić wirusy.
Odwiruj próbkę, zbierz supernatant zawierający wirusy i przechowuj w ultra niskiej temperaturze.
Szóstego dnia przefiltruj nadsącz przez membranę o wielkości oczek 0,45 µm w celu usunięcia resztek komórkowych, a zebrany z hodo
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych