Przeprogramowanie ludzkich komórek krwi w indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste za pomocą wirusa Sendai

Pobrać kulturę mononuklearnych komórek krwi obwodowej (PBMCs) człowieka.

Dodać wirusa Sendai kodującego czynniki transkrypcyjne reprogramujące. Przykryć i szczelnie zamknąć płytkę.

Wirówka w celu zwiększenia kontaktu wirusa z komórkami, a następnie inkubacja.

Po fuzji wirusa, wirusowe RNA wykazuje ekspresję czynników transkrypcyjnych, które aktywują komórkowe geny pluripotencji i represują geny specyficzne dla danej linii komórkowej, aby zainicjować reprogramowanie.

W tym czasie podgrupa transdukowanych PBMC przekształca się w indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste (iPSCs) i wykazuje ekspresję białek adhezyjnych.

Przenieś je do dołka pokrytego matrycą i odwiruj komórki. Zastąp nadsącz pożywką wzrostową.

Po inkubacji iPSC przylegają do macierzy, podczas gdy transdukowane nieprylegające PBMC pozostają w zawiesinie.

Przenieś zawiesinę do powleczonego dołka i odwiruj. Dodaj pożywkę do pierwotnego dołka i inkubuj obie próbki.

Pozostałe przetransdukowane PBMC rozpoczynają reprogramowanie, przekształcają się w iPSC i przylegają do podłoża. Krok ten maksymalizuje retencję reprogramowanych komórek.

Wymieniaj pożywkę codziennie, aby podtrzymać wzrost iPSC.

W tej procedurze należy przenieść ko