JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:41 min. • August 31st, 2026
Zacznij od probówek zawierających ludzkie komórki nabłonka płuc.
Dodaj biotynilowane wirusy grypy i inkubuj na lodzie. Wirusy wiążą się z powierzchnią komórek, nie ulegając internalizacji.
Odwirować, aby oddzielić komórki z przywiązanym wirusem, usunąć nadsącz i resuspenderować.
Do probówki z punktu czasowego zero dodać nieoznaczoną streptawidynę, która wiąże się z biotynylowanymi wirusami, tworząc kompleksy.
Dodaj znakowaną fluorophorem streptawidynę, która nie wiąże się z kompleksem wirusa streptawidyna-biotyna. Przemyj i utrwal komórki.
Inkubuj probówkę z późniejszym punktem czasowym w wyższej temperaturze, aby umożliwić internalizację wirusa, a następnie przenieś ją z powrotem na lód.
Dodać nieznakowaną streptawidynę oraz środek blokujący internalizację, który zapobiega dalszemu pobieraniu wirusa, a następnie inkubować. Streptawidyna wiąże biotynilowane wirusy związane z powierzchnią, po czym należy przeprowadzić etapy płukania.
Utrwal komórki i dodaj bufor zawierający detergent, aby je permeabilizować.
Przemyć i dodać znakowaną fluoroforem streptawidynę, która wnika do komórek i wiąże się z biotyną.
Przeanalizuj próbki metodą cytometrii przepłyewej.
Wyższa fluorescencja w późniejszym pu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych