JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 5:13 min. • August 31st, 2026
Należy pobrać jądra komórkowe zawierające genomy wirusowe, znakowane nukleotydami zmodyfikowanymi alkinią.
Zawiesić jądra w mieszaninie biotyny-azydku i jonów miedzi, a następnie inkubować.
Jon miedzi wspomaga tworzenie wiązania kowalencyjnego między grupą azydkową a alkinową.
Odwiruj i odlej nadsącz.
Resuspendować w buforze, przenieść i odwirować w celu utworzenia osadu.
Szybko zamrozić, a następnie rozmrozić osad, aby ułatwić lizę.
Resuspenduj i poddaj sonikacji w celu lizy jąder komórkowych.
Odwirować i zebrać nadsącz zawierający kompleksy białko-viralne DNA.
Przefiltruj nadsącz, aby usunąć zanieczyszczenia.
Rozcieńczyć filtrat.
Dodać magnetyczne kulki pokryte streptawidyną i inkubować w celu ułatwienia wiązania z biotynilowanymi kompleksami białko-DNA.
Zastosuj pole magnetyczne, aby zebrać kuleczki, a następnie wypłucz je w celu usunięcia zanieczyszczeń.
Powtórz płukanie.
Dodaj bufor eluujący i podgrzej w celu oddzielenia i denaturacji białek.
Oddziel koraliki i zbierz eluat.
Szybko zamroź wyizolowane białka. Przechowuj w ultra-niskich temperaturach do dalszych analiz.
Po całkowitym usunięciu PBS, ponownie zawiesić pellet jąder komórkowych w 10 ml mieszaniny do reakcji click, delikatnie pipetu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych