JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:27 min. • August 31st, 2026
Zacznij od zamrożonej tkanki recelularyzowanej wątroby szczura zawierającej ludzkie hepatocyty, zatopionej w medium do kriokonserwacji.
W tej tkance transdukowane hepatocyty wykazują ekspresję szmaragdowego zielonego białka fluorescencyjnego (EmGFP), białka reporterowego kodowanego przez wektor wirusowy.
Użyj kriostatu do wykonania cienkich przekrojów zachowujących architekturę komórkową i tkankową. Przenieś przekroje na szkiełko.
Przetraktuj skrawki łagodnym detergentem, aby spermabilizować błonę komórkową.
Nanieś przeciwciało pierwszorzędowe anty-EmGFP, które specyficznie wiąże się z fluorescencyjnym białkiem reporterowym ekspresowanym w transdukowanych komórkach.
Przemyć, aby usunąć niezwiązane przeciwciała.
Należy wprowadzić przeciwciało wtórne sprzężone z czerwonym fluoroforem, które wiąże się z przeciwciałem pierwotnym, a następnie przeprowadzić przemywanie.
Dodaj niebieski barwnik fluorescencyjny specyficzny dla DNA, który wiąże się z komórkowym DNA.
Pod mikroskopem fluorescencyjnym kolokalizacja czerwonej fluorescencji z jądrami barwionymi na niebiesko potwierdza, że transdukowane hepatocyty w tkance wątroby skutecznie wykazują ekspresję wirusowego białka reporterowego.
Za pomocą sk
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych