Przygotowanie zawiesiny wzbogaconej w wirusy przy użyciu stopniowego wirowania w sacharozie

Rozpocznij od probówki do ultrawirowania zawierającej gradient sacharozy.

Ostrożnie nanieś na wierzch supernatant zawierający wirusa.

Wiruj z kontrolowanym przyspieszeniem i zwalnianiem, aby zachować gradient, co pozwoli cząsteczkom osadzić się w warstwie odpowiadającej ich gęstości wyporności w trakcie wirowania.

Lżejsze białka pozostają w górnej warstwie. Nienaruszone cząsteczki wirusowe koncentrują się pomiędzy warstwami o niższej i wyższej gęstości, natomiast cięższe szczątki komórkowe osadzają się na dnie.

Odrzuć górne warstwy i zbierz środkowe, wzbogacone w wirusy frakcje sacharozy do nowej probówki.

Dodać bufor i kilkukrotnie wymieszać próbkę.

Następnie ostrożnie nałóż zawiesinę wirusową na poduszkę z sacharozą o niskiej gęstości w nowej probówce.

Odwiruj zawiesinę. Cięższe cząstki wirusowe osadzają się na dnie, podczas gdy lżejsze zanieczyszczenia pozostają w supernatancie.

Odrzuć supernatant. Odlej pozostały płyn, odwracając probówkę do góry dnem na ręcznik papierowy.

Resuspenduj pellet wirusowy w buforze.

Zawiesina wzbogacona w wirusy jest gotowa do dalszych badań.

Napełnij stożkowate probówki do ultrawirowania różnymi stężeniami sacharozy, aby utworzyć warstwy gradientu sacharozowe