JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:51 min. • August 31st, 2026
Należy pobrać wektory lentiwirusowe zawierające antygen HIV-1 p24, który jest markerem białkowym wykorzystywanym do detekcji.
Dodaj detergent, aby zlizować komórki i uwolnić p24, a następnie wykonaj rozcieńczenia seryjne próbki.
Należy użyć mikropłytki pokrytej przeciwciałami monoklonalnymi anty-p24 oraz środkiem blokującym w celu zapobiegania niespecyficznemu wiązaniu.
Nanieś rozcieńczenia próbek oraz standardy p24 w charakterze referencji.
Inkubować, aby umożliwić interakcję p24 z przeciwciałami poprzez specyficzny epitop, a następnie usunąć niezwiązane komponenty.
Inkubować z poliklonalnymi przeciwciałami anty-p24, które wiążą się z różnymi epitopami białka p24. Usunąć wszelkie niewiązane przeciwciała.
Dodaj przeciwciała sprzężone z peroksydazą, które wiążą się z przeciwciałami poliklonalnymi. Usuń niewiązane przeciwciała.
Dodaj substrat peroksydazy, który przekształca się w barwny produkt.
Dodaj kwas, aby dezaktywować peroksydazę i ustabilizować produkt.
Zmierz absorbancję odpowiadającą intensywności koloru, która jest proporcjonalna do stężenia p24.
Wygeneruj wykres wzorcowy i oszacuj stężenia próbek, aby określić miano wirusa.
Płytkę 96-dołkową o wysokim wiązaniu pokryć 100 µL przeciwci
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych