JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:44 min. • August 31st, 2026
Zacznij od mieszaniny plazmidów zawieszonych w pożywce.
Pierwszy plazmid przenosi genom rekombinowanego wirusa adeno-zależnego (AAV), który koduje geny zainteresowania.
Drugi plazmid koduje białka Rep i Cap.
Trzeci plazmid koduje białka pomocnicze.
Dodaj środek do transfekcji do roztworu plazmidu. Wymieszaj dokładnie i inkubuj.
Dodatnio naładowany środek do transfekcji wiąże się z ujemnie naładowanym plazmidowym DNA, tworząc kompleksy.
Wprowadzić kompleksy do monowarstwy komórek ssaków. Inkubować.
Kompleksy wnikają do komórek poprzez endocytozę.
Wewnątrz komórek geny zakodowane w plazmidzie sterują ekspresją białek wirusowych.
Białko Rep replikuje genom wirusa, podczas gdy białka Cap tworzą otoczki kapsydu.
Białko Rep wraz z białkami pomocniczymi pakuje zreplikowany genom wirusa do kapsydów, tworząc kompletne cząsteczki AAV.
Rekombinowane wektory AAV przenoszące interesujący gen są gotowe do zastosowań w dostarczaniu genów.
Po przygotowaniu konstruktów rAAV9 i wyhodowaniu komórek HEK293 zgodnie z protokołem tekstowym, aby przeprowadzić transfekcję komórek w pierwszym dniu, należy połączyć 70 µg plazmidu AAV Rep-Cap, 70 µg plazmidu rAAV9 oraz 200 µg plazmidu Ad helper w 50-ml probówce do wirowa
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych