Oznaczanie rozmieszczenia wirusowego RNA w komórkach gospodarza za pomocą fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ

0 wyświetleń • 4:23 min. • August 31st, 2026

Zacznij od preparatu na szkiełku zawierającego permeabilizowane, zainfekowane wirusem komórki gospodarza, w których wirusowe RNA są rozmieszczone pomiędzy przedziałami jądrowymi a cytoplazmatycznymi.

Należy dodać bufor przedhybrydyzacyjny i inkubować w warunkach wilgotnych.

W buforze odczynniki blokujące blokują nieswoiste miejsca wiązania, natomiast inhibitory RNazy dezaktywują RNazy i zachowują integralność RNA.

Usunąć bufor i dodać zdenaturowane, znakowane digoksygeniną sondy oligonukleotydowe komplementarne do viral RNA.

Inkubować w ciemności, aby umożliwić hybrydyzację sondy z RNA, a następnie wielokrotnie przemyć.

Dodaj utrwalacz, aby ustabilizować hybrydy sonda-RNA, a następnie wielokrotnie przemyj próbkę. Dodaj bufor z dodatkiem detergentu, aby utrzymać przepuszczalność komórek.

Dodaj przeciwciało anty-digoksygeniniowe sprzężone z zielonym fluoroforem, które oddziałuje z digoksygeniną, a następnie kilkakrotnie przemyj.

Utrwal komórki, aby zachować kompleksy, a następnie ponownie je przemyj.

Dodaj barwnik wiążący się z DNA w celu zabarwienia jąder komórkowych. Wielokrotnie wypłucz nadmiar barwnika.

Przykryć szkiełkiem podstawowym i uszczelnić.

Pod mikroskopem konfokalnym zwizualizuj z

Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych

Zaloguj się

Przeglądaj więcej filmów

Wykrywanie RNA wirusa