JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 4:23 min. • August 31st, 2026
Zacznij od preparatu na szkiełku zawierającego permeabilizowane, zainfekowane wirusem komórki gospodarza, w których wirusowe RNA są rozmieszczone pomiędzy przedziałami jądrowymi a cytoplazmatycznymi.
Należy dodać bufor przedhybrydyzacyjny i inkubować w warunkach wilgotnych.
W buforze odczynniki blokujące blokują nieswoiste miejsca wiązania, natomiast inhibitory RNazy dezaktywują RNazy i zachowują integralność RNA.
Usunąć bufor i dodać zdenaturowane, znakowane digoksygeniną sondy oligonukleotydowe komplementarne do viral RNA.
Inkubować w ciemności, aby umożliwić hybrydyzację sondy z RNA, a następnie wielokrotnie przemyć.
Dodaj utrwalacz, aby ustabilizować hybrydy sonda-RNA, a następnie wielokrotnie przemyj próbkę. Dodaj bufor z dodatkiem detergentu, aby utrzymać przepuszczalność komórek.
Dodaj przeciwciało anty-digoksygeniniowe sprzężone z zielonym fluoroforem, które oddziałuje z digoksygeniną, a następnie kilkakrotnie przemyj.
Utrwal komórki, aby zachować kompleksy, a następnie ponownie je przemyj.
Dodaj barwnik wiążący się z DNA w celu zabarwienia jąder komórkowych. Wielokrotnie wypłucz nadmiar barwnika.
Przykryć szkiełkiem podstawowym i uszczelnić.
Pod mikroskopem konfokalnym zwizualizuj z
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych