JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:52 min. • September 30th, 2026
Należy rozpocząć od kultury bakteryjnej zawierającej zintegrowany genom profaga tłumiony przez białko represora faga, co utrzymuje uśpioną fazę lizogeniczną.
Dodaj induktor i inkubuj z wytrząsaniem, aby wywołać stres komórkowy.
Stres komórkowy indukuje autokatalityczne cięcie białka represora, co umożliwia profagowi przejście z lizogenii do replikacji litycznej.
DNA profaga wycina się z genomu bakteryjnego i sekwencyjnie transkrybuje wczesne geny regulacyjne, środkowe geny replikacji DNA oraz późne geny strukturalne i lizy.
Przenieś kulturę do dużej objętości pożywki, aby rozcieńczyć induktor, i inkubuj w celu umożliwienia regeneracji komórek.
W określonych odstępach czasu dodaj roztwór zatrzymujący, aby zahamować transkrypcję i zachować profil RNA w komórkach bakteryjnych.
Odwiruj kulturę i odlej nadsącz. Resuspenduj komórki, przenieś zawiesinę do małej probówki i odwiruj.
Usuń nadsącz i zamroź pellet w ciekłym azocie, aby zachować integralność RNA.
Na koniec należy dodać odczynnik do ekstrakcji RNA i homogenizować zawiesinę w celu rozbicia komórek. Próbka jest gotowa do izolacji RNA i późniejszej analizy transkryptomicznej.
Następnie do oznaczonej kolby z kulturą indukowaną zawierającej 8
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych