JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:35 min. • August 31st, 2026
Należy rozpocząć od przefiltrowanego lizatu komórkowego zawierającego wektory wirusa towarzyszącego adenowirusom (AAV) oraz zanieczyszczenia pochodzące od gospodarza.
Przepuść lizat przez kolumnę powinowactwa opartą na heparynie.
Białka kapsydu wirusa wiążą się elektrostatycznie z ujemnie naładowanymi grupami heparyny.
Przepłucz kolumnę buforem w celu usunięcia niezwiązanych zanieczyszczeń.
Nanieś bufor zawierający detergent, aby rozpuścić szczątki błonowe.
Ponownie przepłucz buforem bez detergentu.
Wprowadź bufor uzupełniony kationami w celu stworzenia środowiska jonowego, a następnie przemyj kolumnę buforem o umiarkowanym stężeniu soli, aby usunąć słabo związane zanieczyszczenia.
Dodaj bufor o wysokim stężeniu soli, aby przerwać oddziaływania kapsydu z heparyną i eluować cząstki wirusowe.
Zebrać frakcje elucji wzbogacone w nienaruszone cząsteczki wirusowe i przenieść je do probówek do koncentracji odśrodkowej wyposażonych w membrany filtrujące.
Wirowarkę wykorzystać do odwirowania zawartości probówek w celu usunięcia nadmiaru buforu, a następnie zebrać skoncentrowane frakcje wirusowe do probówki.
Przepłucz membranę buforem, aby odzyskać pozostałe cząstki wirusowe i zmaksymalizować wydajnoś
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych