JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:21 min. • September 30th, 2026
Należy rozpocząć od oczyszczonej frakcji enzymu integrazowego wirusa, zawierającej resztkową nukleazę bakteryjną jako zanieczyszczenie.
Nałóż próbkę na kolumnę z żywicą heparin-Sepharose, uprzednio wyrównoważoną niskosolnym buforem wiążącym.
Podczas przechodzenia mieszaniny przez kolumnę integrazą wiąże się z ligandem heparynowym silniej niż zanieczyszczająca ją nukleaza.
Następnie stopniowo zwiększaj stężenie soli w buforze przepływającym przez kolumnę.
Przy niskich stężeniach soli najpierw eluują słabo związane nukleazy, natomiast silnie związana integraza eluuje później, przy wyższych stężeniach soli.
Zbierz eluowane frakcje oddzielnie, aby odseparować zanieczyszczającą nukleazę od integrazonu.
Do każdej frakcji dodaj bufor do próbek SDS-PAGE i podgrzej, aby zdenaturować białka. Nanieś próbki na żel SDS-PAGE i przeprowadź rozdział elektroforetyczny.
Zaobserwuj zabarwiony żel.
Zidentyfikuj frakcje zawierające wyraźny prążek integrazą bez widocznych zanieczyszczających białek, co wskazuje na pozorną czystość.
Aby przeprowadzić frakcjonowanie integrazy wirusa piankowego typu prototypowego (PFV IN) za pomocą chromatografii powinowactwa do heparyny, należy obniżyć stężenie chlorku sodu w prób
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych